Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Öğrenci: MUSTAFA İŞMARCI
Danışman: ELİF LOĞOĞLU
Özet:Bu çalışmada Bacıllus megaterium'dan proteaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Bacillus megaterium ağırlık/hacim olarak % 0,5 maya eksraktı, %1 pepton , %1 glukoz, %1 tripton içeren besiyerinde 37 0C'de 24 saat süresince çoğaltılmıştır. Proteaz enzimi, %80 amonyum sülfat çöktürmesi ve DEAE selüloz anyon değişim kromatografisiyle %7,68 verimle ham ekstrakta göre 5,18 kat saflaştırılmıştır. Enzimin spesifik aktivitesi 1136 U/mg'dır. Enzimin optimum pH ve sıcaklığı sırası ile 12 ve 70 0C'dir. Enzim aktivitesi üzerine metal iyonlarının etkisi incelendiğinde Ca2+ , Mg2+ ve Fe+3 enzim aktivitesini arttırırken K+1,Sn+2, Ni+2,Cu+2 ve Al+3 varlığında aktivitede kayıp gözlenmiştir. Co+2 ve Sr2+ iyonlarının ise enzim aktivitesi üzerine bir etkisi olmamıştır. Enzim kazein, jelatin, soya fasulyesi unu, BSA ve ovalbumin (Yumurta albumini), gibi doğal substratlar karşısında en yüksek aktiviteyi kazeine karşı göstermiştir. DMSO, 2-propanol, toluen, metanol enzim aktivitesini arttırırken Etanol herhangi değişikliğe sebep olmamıştır. Aseton ve asetonitril çok az miktarda aktiviteyi düşürmüştür. Deterjan katkı maddelerinden olan SDS aktiviteyi %31 oranında arttırmıştır. TritonX-100 aktiviteyi %40 aranında azaltırken, H2O2 nin %2'lik ve %5'lik her iki çözeltiside aktiviteyi %25 oranına kadar düşürmüştür. Enzim alkali proteaz inhibitörü olan PMSF tarafından inhibe edilmiştir. EDTA varlığında ise aktivitesinde çok az düşüş gözlenmiştir. Bu inhibisyon profili enzimin serin alkali proteaz olduğunu ve aktif merkezinin yakınında serin kalıntılarının bulunduğunu göstermiştir. Saflaştırılan enzimin Km ve Vmaks Kinetik parametreleri kazein subsratı kullanılarak sırasıyla 0,77 mg/ml, 3,58 μmol.ml-1 .dak-1 olarak bulunmuştur.