Türkiye'de SARS-CoV-2 virüsünün s geni mutasyonlarının araştırılması ve filogenetik analizler


Creative Commons License

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2023

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: ASLI AĞAR

Danışman: Leyla Açık

Özet:

Aralık 2019’un sonlarında, Çin’in Wuhan şehrinde tanımlanamayan bir mikrobiyal ajan nedeniyle viral pnömoni ile başvuran hastalar bildirilmiştir. Daha sonra bu patojen yeni bir koronavirüs olarak tanımlanmış ve SARS-CoV-2 olarak adlandırılmıştır. Genom dizisi olarak 2019-nCoV’un Doğu Çin’in Zhoushan kentinde 2018’de toplanan iki yarasa kaynaklı bat-SL-CoVZC45 ve bat-SL-CoVZXC21 ile yakından ilişkili ancak SARS-CoV ve MERSCoV’den daha uzak ilişkili olduğu bulunmuştur. Çalışmamız Türkiye’deki COVID-19 mutasyonlarının seyrinin belirlenmesi amacıyla gerçekleştirilmiştir. COVID-19 hastalık etkeni SARS CoV-2 virüsünü saptamak için önerilen mevcut laboratuvar testi stratejisi, SARS-COV-2’ye özgü gen bölgelerinin varlığını tespit etmek amaçlı yapılan SARS CoV-2 Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) testidir. Gerçekleştirilmiş olan RTPCR testi sonuçlarında; CT (eşik döngüsü) 20-25 aralığında bulunan ve yüksek pozitif olarak belirlenen virüs örnekleri kullanılmıştır. Hastalık etkeni SARS CoV-2 virüsünü tespit etmek için 2021 ve 2022 yılları boyunca Covid-19 pozitif tanısı konulan ve eşik döngüsü koşullarını sağlayan, rastgele 30 hastadan elde edilmiş olan viral RNA (sürüntü örneklerinden izole edilmiş) izolatları kullanılmıştır. Dünya Sağlık Örgütü SARS-CoV2’nin varyantlarını, dikkate alınması gereken varyantlar (VOI) ve endişe verici varyantlar (VOC) olarak ikiye ayırmaktadır. Endişe verici varyantlardan; en az değişikliğe uğradığı belirtilen ve virüsün hücreye girişi açısından önemli olan S “spike” proteininde ve de özellikle bu proteinin reseptör bağlanma bölgesinde olan değişimler üzerindeki mutasyonlar VOI grubu içindedir. Çalışmamızda, Spike bölgesini hedefleyen spesifik primer çiftleri kullanılarak yapılan Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) çalışmaları sonrasında elde edilen ürünler Yeni Nesil Dizileme (NGS) tekniği kullanılarak DNA dizi analizi yapılmış ve elde edilen S geni mutasyonları karşılaştırılmıştır. Elde edilen verilerin analizinden çıkan sonuçlar numune alım zamanları ve aynı nokta mutasyonları ile karşılaştırmalı olarak incelenmiştir.