Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Öğrenci: EDA ÇİNAR AVAR
Danışman: ELİF LOĞOĞLU
Özet:Difteri, Corynebacterium diphtheriae bakterisi tarafından üretilen toksin ile oluşan bir üst solunum yolu hastalığıdır. Dünya Sağlık Örgütü' nün 2013 yılına ait verilerine bakıldığında; difteri hastalığının hala dünyanın birçok bölgesinde meydana geldiği görülmektedir. Ülkemizde bu hastalığın görülme oranı azalmış olsa da; yetişkin popülasyonda duyarlılığın yüksek olması, aşılama hedeflerine ülkenin her yerinde istenilen oranlarda ulaşılamaması ve koruma amaçlı olarak kullanılan aşıların yurt dışından ithal edilmesi gibi nedenler, difteri hastalığını potansiyel bir sorun olarak karşımıza çıkarmaktadır. Difterinin klinik olarak tanısı kültür yöntemiyle yapılmakta ve bu da belirli bir zamanı kapsamaktadır. Bu durumda erken tanı ve tedavi hastalığın kontrolü için oldukça önemlidir. Monoklonal antikor temelli tanı kitleri oldukça hızlı ve güvenilir sonuçlar vermektedir. Bu çalışmada difteri toksinine karşı monoklonal antikor üretilmesi ve üretilen antikorun karakterizasyon çalışmalarının yapılması amaçlanmıştır. Bu amaç doğrultusunda; antijen olarak kullanılan difteri toksoidi, belirli dozlarda ve belirli zaman aralıklarıyla 6-8 haftalık Balb/C türü farelere intraperitonal yolla enjekte edildi. Farelerin antikor titreleri dolaylı ELISA yöntemiyle test edildi ve en iyi immün yanıtı veren fare seçilerek füzyona alındı. Polietilen glikol (PEG) varlığında, füzyona alınan farenin dalak hücreleri ve F0 myeloma hücreleri kullanılarak füzyon gerçekleştirildi. Spesifik antikor üreten hibridoma hücreleri (2F5, 5A5, 5A6) dolaylı ELISA ile belirlendikten sonra bu hücreler in vitro olarak (bulundukları besi ortamında) çoğaltıldı. En yüksek antikor yanıtı veren 5A5 klonu için ultrafiltrasyon ve jel filtrasyon kromatografi metotları ile saflaştırma işlemi gerçekleştirildi. Elde edilen monoklonal antikorun immünglobulin tipinin IgG1 ve hafif zincirinin ise κ (kappa) olduğu belirlendi. Western blot analiziyle 5A5 monoklonal antikorunun, toksinin hem A hem de B fragmentine karşı oluştuğu belirlendi. İn vitro nötralizasyon testi ile ultrafiltratın flokülasyon sınırı 40 Lf/ml, 25 nolu fraksiyonun ise 5 Lf/ml olarak bulundu.