Hava yolu ile bulaşan bazı bakteriyel etkenlere karşı ıgy teknolojisine dayalı klima filtre sisteminin geliştirilmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, -, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ALI HUSSEIN MOHAMMED AFANDI
Danışman: FUNDA DOĞRUMAN AL
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Çalışmamızda, nozokomiyal pnömoni etkeni olarak sık tanımlanan, S.aureus, P.aeruginosa ve K. pneumoniae bakterileri kullanılarak hazırlanan antijenleri tavukların kas içine enjekte edilerek immünizasyonları gerçekleştirilmiştir ve antikorların etkinliği ELISA yöntemi ile değerlendirilmiştir. İmmünizasyon sonrası bakterilere karşı oluşan IgY antikorlarının saflaştırılması ve elde edilmesi için PEG 6000 kullanılmıştır. Elde edilen IgY antikorlarının etkinliği ELISA yöntemiyle tanımlandıktan sonra spesifik IgY antikorlar cam elyaf yapısına sahip olan filtreye capture ELISA yöntemi kullanılarak sabitlenmiştir. Her bakteri için geliştirilen IgY bazlı filtrelerin bakteri yakalama kapasitesini test etmek için anti-bakteri IgY içeren ve antikor içermeyen filtreler üzerine dört defa 1-20 dakika aralıkla bakteriler püskürtülmüştür ve filtrelerin arkasına konulan besiyerlerinde (kanlı agar ve EMB) koloni sayımı yapılmıştır. S.aureus, P.aeruginosa, K.pneumoniae ile immunize edilmiş ve edilmemiş tavukların IgY antikorlar arasındaki OD değerleri farklı dilüsyonlarda (1/100 ve 1/1000) karşılaştırıldığında; immunize olan tavukların yumurtalarından izole edilen IgY antikorların OD değerlerinin ODC değerinden daha yüksek olduğu saptanmıştır (p˂0.05). S.aureus, P.aeruginosa ve K.pneumoniae'a karşı geliştirilen spesifik IgY antikorlarının bakteri yakalama kapasitesini test etmek için IgY antikorları farklı konsantrasyonlarda hazırlanarak (100, 200, 300, 400, 500 ve 750 µg/ml) filtreler kaplanmıştır. Bakteri konsantrasyonları 5x104, 3x107, 6x107, 7.5x107, 1.5x108, 3.0x108, 4.5x108 ve 6.0x108 cfu/ml olarak hazırlanmıştır. Püskürtme işlemi 1- 20 dakika aralıklarla test edilmiştir. Anti-S.aureus IgY içeren filtrelerde üreyen ortalama koloni sayısı 10 iken antikor içermeyen filtre arkasında 540 koloni sayılmıştır, anti-P.aeruginosa IgY içeren filtrede a 5-10 koloni saptanırken antikor içermeyen filtrede üreyen koloni sayısı 837 olarak sayılmıştır. Püskürtülen en uygun S.aureus bakteri konsantrasyonu 2x105 cfu/ml yoğunluğundayken P.aeruginosa bakteri konsantrasyonu 5x104 cfu/ml yoğunluğunda saptanmıştır. En etkili antikor konsantrasyonu anti-S.aureus IgY ve anti-P.aeruginosa IgY antikor içeren filtrelerde 500 µg/ml saptanmıştır ve en uygun zamanın ise 10 dakika olduğu belirlenmiştir. Bu sonuçların istatistiksel olarak anlamlı farklılık gösterdiği tespit edilmiştir (p<0.05). Optimizasyon çalışmaları süresince anti-K.pneumoniae IgY konsantrasyonları ve püskürtme süreleriyle elde edilen sonuçlar arasında tutarsız bulgular saptanmıştır. Bu nedenle anti-K.pneumoniae IgY ile hazırlanan filtreler ile sonuç alınmamasının; I: immunizasyon sonrası etkili IgY oluşumunun olmamaması, II: antijen hazırlanmasından kaynaklanan nedenlere bağlı olabileceği, III: antijen eldesi için kullanılan suşa bağlı olabileceğini kaynaklandığı düşünülmektedir. Çalışmamızda elde edilen veriler nozokomiyal pnömoni etkeni olarak sık izole edilen bakterilere karşı tavuklardan elde edilen IgY antikorlarının etkinliğinin yüksek olduğunu göstermiştir. IgY antikorlarının gelecekte tanı, tedavi ve endüstriyel kullanımda özellikle anti-mikrobiyal maske ve biyofiltre geliştirilmesinde etkin olarak kullanılabileceği düşüncesine varılmıştır.