Hepatit B virüs yüzey antijeninin (HBsAg) saptanmasına yönelik HBsAg-ELISA tanı kiti yapılması ve değerlendirilmesi
Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Tıp Bilimleri, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 1999
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: BÜLENT NURİ TAYŞİ
Danışman: CEMALETTİN AYBAY
Özet:51 6. ÖZET Hepatit B infeksiyonunun serolojik tanısında sıklıkla ELISA testi kullanılmaktadır. Ancak tanı kitlerinin tamamı yurtdışından temin edilmektedir. Bu çalışmada niteliksel bir HBsAg-ELISA testinin yapılması planlandı. Bu amaçla, laboratuvanmızda daha önce üretilmiş olan anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl salgılayan hibridoma hücrelerinden elde edilen monoklonal antikorlar kullanıldı. Anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl monoklonal antikorlar hem "adw" ve "ayw" subtip antijenlere hem de "ad" + "ay" kaplı katı faza bağlanmaktadır. Anti-HBs IgM, fare asit sıvısından "size exclusion chromatography" sonrası bulaş IgG eliminasyonu için protein G kolonundan geçirilerek saflaştınldı. Anti-HBs IgGl için doğrudan hibridoma kültür süpernatanı kullanıldı. HBsAg-ELISA testi için 96 çukurlu plaklar anti-HBs IgM ile kaplandı. Serum örneklerinin inkübasyonu sonrasında çukurlara anti-HBs IgGl eklendi. Anti-HBs IgM- HBsAg-anti-HBs IgGl bağlanması ise peroksidaz işaretli "anti-mouse IgG" kullanılarak saptandı. Kemiluminesan sisteme dayalı Access otoanalizör ile HBsAg (+) olduğu saptanan 228, HBsAg (-) olan 72 serum örneği HBsAg ELISA testi ile tekrar çalışılarak karşılaştırma yapıldı. Laboratuvanmızda hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılığı %96,5, tanısal özgüllüğü ise %100 olarak belirlendi. Sonuç olarak hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılık oranı yükseltildikten sonra serolojik tanı amacıyla kullanılabileceği öngörüldü.