Blastocystis türlerinde pirosekans yöntemiyle alttür belirlenmesi


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2013

Öğrenci: TUĞÇE NİL YANTIRA

Danışman: FUNDA DOĞRUMAN AL

Özet:

Blastocystis uzun yıllar sınıflandırılamamış, kimi yazarlarca mantar, kimi yazarlarca protozoon sınıflamasına dahil edilmiş olan bir mikroorganizmadır. Brump tarafından 1912 yılında Blastocystis hominis olarak olarak isimlendirilmiştir. Günümüzde Blastocystis alttürleri insan ve hayvanlarda da enfeksiyona neden olduğu bilinmektedir. Blastocystis enfeksiyon, fekal-oral yolla bulaşmaktadır; genellikle asemptomatiktir. Blastocystis gelişmekte olan ülkelerde yaşayanlarda gelişmiş ülkelere oranla daha sık görülmektedir. Özellikle tropikal ve subtropikal ülkelerde daha sık olarak rastlanılan tüm dünyada yaygın olarak bulunmaktadır. Çalışmamızın amacı, Blastocystis izolatlarının alt tiplerinin spesifik polimorfizimlerine dayalı genotipleme için kullanılan PZR ile pirosekans yöntemlerini karşılaştırmaktır. Çalışmada, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Araştırma Laboratuarı ve Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi mikrobiyoloji Laboratuvarına Eylül 2011- Kasım 2012 dönemleri arasında farklı parazitolojik inceleme amacıyla gönderilen dışkı örneklerinden izole edilen Blastocystis konvansiyonel PZR ve pirosekans yöntemleriyle ile genotiplendirilmiştir. Çalışmamızda konvansiyonel PZR yöntemiyle 60 örneğin yedisi subtip 1, dokuzu subtip 2, kırkbiri subtip 3 olarak tanımlanmıştır. Pirosekans yöntemiyle 60 örneğin altısı subtip 1, onbiri subtip 2, kırkı subtip 3 olarak tanımlanmıştır. Pirosekans ile konvansiyonel PZR sonuçları kıyaslandığında, pirosekans ile subtip 2 olarak tiplendirilen 2 örnekten bir tanesi konvansiyonel PZR ile subtip 1, diğeri de subtip 3 olarak genotiplendirilmiştir. Ayrıca pirosekans ile subtip 3 olarak genotiplendirilen bir örnek de konvansiyonel PZR ile subtip1 olarak genotiplendirilmiştir. Konvansiyonel metodlar ile bir Blastocystis örneği subtip1-2, 2 örnek de subtip 2-3 mix enfeksiyon şeklinde tiplendirilmiş ve bu örneklerden pirosekans ile subtip1-2? nin subtip 2, subtip 2-3 olanların da subtip 3 olarak belirlediği saptanmıştır. Konvansiyonel PZR ve pirosekans yönteminin uyumluluğuna bakıldığında sadece 3 örnekte farklı genotiplendirme yaptıkları görülmüştür. İki yöntemin %94,7 oranında aynı sonucu verdiğini saptanmıştır. İstatistiksel analizi yapılmış kappa testi ile uyumluluğa bakılmış ve % 88 oranında uyumlu çalıştıkları gösterilmiştir. Pirosekans yöntemi altın standart olarak kabul edilip ve konvansiyonel PZR yönteminin özgüllük ve duyarlılığı hesaplandığında Pirosekans yöntemine göre % 95 duyarlılığa ve %95,2 özgülüğe sahip olduğu tespit edilmiştir. Konvansiyonel PZR ve ülkemizde ilk defa Blastocystis alttür tayininde kullanılan pirosekans yönteminin karşılaştırılmasında iki yöntemin Blastocystis saptanmasında uyumlu olduğu, Blastocystis alttür tayininde pirosekans yöntemi konvansiyonel PZR yöntemine göre daha hızlı ve doğru sonuçlar elde edilebileceği sonucuna varılmıştır.