Toplam Protein Tayininde Nanopartikül Tabanlı Yeni Analiz Sistemlerinin Geliştirilmesi


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Merve Eryılmaz

Danışman: UĞUR TAMER

Özet:

Toplam protein miktarının belirlenmesi yaşam bilimleri için önemli bir analitik konudur. Sütteki toplam protein miktarının belirlenmesi gıda kalitesi tespitinde ön plana çıkarken, idrar ve kandaki toplam protein miktarının belirlenmesi hastalıkların teşhisinde önem kazanmaktadır. Her alanda tercih edilen yöntemler farklılık göstermektedir, bu yüzden her çalışmada kullanılabilecek hassas hızlı ve basit bir yöntemin geliştirilmesi üzerinde çalışılmıştır. Bu tez kapsamda yüzeyde güçlendirilmiş Raman saçılması (Surface-enhanced Raman Spectroscopy, SERS) kullanılarak toplam protein tayini ile gerçekleştirilmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla iki farklı analitik yaklaşım geliştirilmiştir. İlk olarak klik kimyası temelli toplam protein tayini amaçlanmıştır. Bunun için azid modifiye silikon yüzeyler ve nanoküreler ile 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB)-alkin modifiye nanopartiküller hazırlanarak heterojen ve homojen analiz sistemleri kurulmuştur. Bu sistemlerde ortama eklenen biuret reaktifi üzerine protein standardı eklendiğinde partikül ve yüzey/partikül arasında klik kimyası reaksiyonu gerçekleşmiş ve protein konsantrasyonuna paralel DTNB etiketinin SERS sinyali izlenmiştir. İkinci tayin stratejisinde ise o-fitalaldehit (OPA) molekülü ile toplam protein miktarı tayini nanoçubuklar kullanılarak yapılmıştır. Tamamlanmış OPA reaktifi sadece amin gruplarına spesifik olarak bağlanmaktadır. Artan protein miktarının derişimine paralel OPA molekülünün spektral bant intensiteleri kullanılarak doğrusal kalibrasyon grafiği elde edilmiştir. Geliştirilen her iki yöntemde protein standardı olarak bovin serum albumin (BSA) kullanılmıştır. Gerçek örnek olarak süt numuneleri seyreltme işlemi yapılarak analiz yöntemlerinde denenmiştir.