BAKTERİYEL TOKSİNLERİN KARDİYAK MİYOSİTLER ÜZERİNE APOPTOTİK ETKİSİ


Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Gazi Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2010

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Sultan YOLBAKAN

Danışman: TURGUT İMİR

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Anahtar Kelimeler: BAKTER YEL TOKS NLER N KARD YAK M YOS TLER ÜZER NE APOPTOT K ETK S Bakteriyel toksinlerden kolera toksin, difteri toksini, Stafilokokkal Enterotoksin B, Lipoplisakkarit ‘in farklı konsantrasyonları 24h rat embriyonik kardiyak miyositler ( H9c2 ) ile inkübe edilmistir. Bakteriyel toksinlerin sitotoksik etkisi, hücre canlılıgı ( % )’nın belirlenebilmesi için MTT yöntemi ile analiz edilmistir. Kolera toksin, Stafilokokkal Enterotoksin B, Lipopolisakkarit ’in H9c2 hücrelerinin canlılıgı üzerine etkisi kontrol grubuna göre anlamlı bulunmamıstır. Difteri toksininin H9c2 hücrelerinin canlılıgı üzerine etkisinin doz bagımlı oldugu belirlenmistir. Difteri toksininin 50μg/ml konsantrasyonu H9c2 hücrelerinin canlılık degeri ( % ) degerlendirilmesinde kontrol grubuna göre anlamlı bulunmustur. Difteri toksininin 50μg/ml konsantrasyonu ile 24h inkübe edilen H9c2 hücrelerinde Flow Sitometri yöntemi ile Apoptotik Hücre Artısı ( % ), difteri toksininin farklı konsantrasyonları ile 24h inkübe edilen H9c2 hücrelerinde DCF yöntemi ile reaktif oksijen türleri salınımı, difteri toksininin 50μg/ml konsantrasyonu ile 5h inkübe edilen H9c2 hücrelerinde RT-PCR yöntemi ile Kaspaz 2, Kaspaz 8, Kaspaz 9, Kaspaz 3, Kaspaz 6, Kaspaz7, Fas, Tnfrsf11b, Apaf1, Traf1, Bax mRNA seviyeleri belirlenmistir. Difteri toksininin 50μg/ml konsantrasyonu ile 24h inkübe edilen H9c2 hücrelerinde Apo BRDU yöntemi ile internükleozomal DNA fragmantasyonu, nüklear morfolojinin belirlenmesi amacıyla Hoechst Dye yöntemi kullanılmıstır. 75 Difteri toksininin sitotoksik etkisinin hücrelerde meydana gelen apoptotik etkiden kaynaklandıgı apoptotik hücre artısı ( % ) degeri ile belirlenmistir. Difteri toksininin H9c2 ( rat embriyonik kardiyak miyositler ) üzerine apoptotik etkisinde Kaspaz 2, Kaspaz 9, Kaspaz 7 mRNA seviyesi aktive olmakta Kaspaz 8, Kaspaz 3, Kaspaz 6 mRNAseviyesi degismemektedir. Apoptotik etkide kaspaz aktivitesi önemlidir. Apoptotik yolda rol alan diger gen aktivasyonları degerlendirildiginde Tnfrsf11b , Traf1 mRNA seviyesi aktive olmaktadır. Apaf1 mRNA seviyesi azalmaktadır. Sonuç olarak ; difteri toksini H9c2 hücreler üzerinde apoptotik etki olusturmaktadır. Bu etki apoptozisi indükleme ve inhibe etme olmak üzere iki farklı sekilde meydana gelmektedir.